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02:03:11Habla: Francis Villatoro
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Cuantificación ADN fluorescencia ARN

Ep523. Coffee Break: Señal y Ruido en Directo

11 de septiembre de 2025
4 momentos
Con
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Francis Villatoro explica que la cuantificación del ADN mediante fluorescencia en presencia de ARN es problemática y requiere protocolos específicos para evitar contaminaciones.

…matices, ¿vale? Hay pequeños cambios, pero son cambios relativamente de tipo ocultos. Ciertos comentarios, que con toda seguridad los revisores lo han criticado muchísimo, pero lo que son los resultados, lo que son las figuras, son prácticamente idénticos. Es decir, y tú si en un artículo que pusiste el preprint con tres autores y ahora lo republicas en una revista con dos nuevos actores y te olvidas de citar a los otros tres, bueno, no pasa nada, pero sí pasa, puede pasar. Y bueno, el artículo básicamente utiliza una metodología que es una metodología doble: por un lado utilizan fluorescencia; la fluorescencia no es adecuada para cuantificar la cantidad de ADN porque en fluorescencia también ves estructuras ligadas entre ARN, sobre todo en un cultivo con ARN. O sea, tú tienes una vacuna de ARN mensajero, o sea, tienes ARN. Y cuantificar el ADN con fluorescencia en presencia de ARN no es nada recomendable y requiere una serie de criterios de calibración; requiere una serie de protocolos para evitar contaminar las muestras, etcétera, que aparentemente no se han seguido, sobre todo porque cuando te lees el artículo te das cuenta de que aquí falta que digan que han hecho esto, porque no dicen que lo han hecho, ¿vale? Es un experto que rápidamente se da cuenta y ha sido muy criticado por eso. Y después utilizan una técnica que es la PCR. La PCR cuantitativa, ¿acordáis de las PCR que se habló en su momento?, que permitían cuantificar los niveles de virus en sangre, etc. Bueno, la PCR cuantitativa es más precisa que la fluorescencia, pero tiene también problemas, porque depende mucho de las dianas, porque recordad que la PCR lo que hace es identificar pequeños trozos de ADN, los primers, y tú tienes que elegir muy bien esos primers para identificar adecuadamente lo que quieras identificar. En el caso de las PCR que usábamos nosotros para detectar si estábamos o no con el coronavirus, eran trocitos de algunas de las proteínas clave del virus, eran básicamente de la nucleocáside, de la proteína N y de la espícula, de la proteína S, básicamente los que más se usaban para identificar si estábamos enfermos o no. Con PCR de este tipo han utilizado dianas, estos primers. Son las dianas, para la fabricación de la red mensajero se utilizan bacterias E. coli adecuadamente modificadas genéticamente y se utilizan plásmidos de esas bacterias E. coli para identificar algunos de los plásmidos. Se llaman los ori, digamos la parte…
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