Búsqueda · 19 momentos en 12 episodios
Borja TosarFrancis VillatoroHéctor SocasJosé EdelsteinMaría RibesGastón GiribetIsabel Corderocuantificación adn fluorescencia arnprotocolos calibración evitar contaminación muestrasartículo nature falta información técnicapcr cuantitativa niveles virus sangreprimers identificación fragmentos adnnucleocáside proteína n en coronavirusproteína s para detectar coronavirusPCRproteína SFrancis VillatoroADNARN mensajeroSV4010 nanogramosARN
PCR
Con
0:000:301:001:302:002:302:58
Francis Villatoro explica las limitaciones de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (PCR) y cómo su precisión depende de la elección cuidadosa de los 'primers' para identificar fragmentos específicos de ADN.
…utilizan fluorescencia; la fluorescencia no es adecuada para cuantificar la cantidad de ADN porque en fluorescencia también ves estructuras ligadas entre ARN, sobre todo en un cultivo con ARN. O sea, tú tienes una vacuna de ARN mensajero, o sea, tienes ARN. Y cuantificar el ADN con fluorescencia en presencia de ARN no es nada recomendable y requiere una serie de criterios de calibración; requiere una serie de protocolos para evitar contaminar las muestras, etcétera, que aparentemente no se han seguido, sobre todo porque cuando te lees el artículo te das cuenta de que aquí falta que digan que han hecho esto, porque no dicen que lo han hecho, ¿vale? Es un experto que rápidamente se da cuenta y ha sido muy criticado por eso. Y después utilizan una técnica que es la PCR. La PCR cuantitativa, ¿acordáis de las PCR que se habló en su momento?, que permitían cuantificar los niveles de virus en sangre, etc. Bueno, la PCR cuantitativa es más precisa que la fluorescencia, pero tiene también problemas, porque depende mucho de las dianas, porque recordad que la PCR lo que hace es identificar pequeños trozos de ADN, los primers, y tú tienes que elegir muy bien esos primers para identificar adecuadamente lo que quieras identificar. En el caso de las PCR que usábamos nosotros para detectar si estábamos o no con el coronavirus, eran trocitos de algunas de las proteínas clave del virus, eran básicamente de la nucleocáside, de la proteína N y de la espícula, de la proteína S, básicamente los que más se usaban para identificar si estábamos enfermos o no. Con PCR de este tipo han utilizado dianas, estos primers. Son las dianas, para la fabricación de la red mensajero se utilizan bacterias E. coli adecuadamente modificadas genéticamente y se utilizan plásmidos de esas bacterias E. coli para identificar algunos de los plásmidos. Se llaman los ori, digamos la parte…
Significado #1 · Palabras #1
Francis Villatoro explica las limitaciones de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (PCR) y cómo su precisión depende de la elección cuidadosa de los 'primers' para identificar fragmentos específicos de ADN.
Habla: Francis VillatoroSignificado #1 · Palabras #1cuantificación adn fluorescencia arnprotocolos calibración evitar contaminación muestrasartículo nature falta información técnicapcr cuantitativa niveles virus sangreprimers identificación fragmentos adnnucleocáside proteína n en coronavirusproteína s para detectar coronavirus…utilizan fluorescencia; la fluorescencia no es adecuada para cuantificar la cantidad de ADN porque en fluorescencia también ves estructuras ligadas entre ARN, sobre todo en un cultivo con ARN. O sea, tú tienes una vacuna de ARN mensajero, o sea, tienes ARN. Y cuantificar el ADN con fluorescencia en presencia de ARN no es nada recomendable y requiere una serie de criterios de calibración; requiere una serie de protocolos para evitar contaminar las muestras, etcétera, que aparentemente no se han seguido, sobre todo porque cuando te lees el artículo te das cuenta de que aquí falta que digan que han hecho esto, porque no dicen que lo han hecho, ¿vale? Es un experto que rápidamente se da cuenta y ha sido muy criticado por eso. Y después utilizan una técnica que es la PCR. La PCR cuantitativa, ¿acordáis de las PCR que se habló en su momento?, que permitían cuantificar los niveles de virus en sangre, etc. Bueno, la PCR cuantitativa es más precisa que la fluorescencia, pero tiene también problemas, porque depende mucho de las dianas, porque recordad que la PCR lo que hace es identificar pequeños trozos de ADN, los primers, y tú tienes que elegir muy bien esos primers para identificar adecuadamente lo que quieras identificar. En el caso de las PCR que usábamos nosotros para detectar si estábamos o no con el coronavirus, eran trocitos de algunas de las proteínas clave del virus, eran básicamente de la nucleocáside, de la proteína N y de la espícula, de la proteína S, básicamente los que más se usaban para identificar si estábamos enfermos o no. Con PCR de este tipo han utilizado dianas, estos primers. Son las dianas, para la fabricación de la red mensajero se utilizan bacterias E. coli adecuadamente modificadas genéticamente y se utilizan plásmidos de esas bacterias E. coli para identificar algunos de los plásmidos. Se llaman los ori, digamos la parte…
Francis Villatoro explica cómo investigadores buscaron marcas específicas en ADN relacionados con plásmidos utilizados para replicar ADN y producir ARN mensajero.
Habla: Francis VillatoroSignificado #4plásmidos para replicar adnespícula en adnvector para amplificar adnbacteria sv40 replica adnori del promotor sv40…primera del plásmido que suele ser siempre la misma, la más adecuada para E. coli, digámoslo así, y entonces el plásmido en concreto depende de lo que vayas a fabricar, del trozo que vayas a fabricar de ese arnés mensajero, pero fabricas ADN, duplicas ADN. Bueno, pues han buscado esa marca, la marca de inicio de esos plásmidos; se han buscado algunos trozos de la espícula en ADN y se han buscado algunos trozos que identifican el vector que se utiliza para amplificar el ADN. Porque tú tienes una pequeña cantidad de ADN, tú tienes una bacteria que se utiliza un papovirus SV40 para replicar ese ADN y sacar muchas copias del ADN y después, a partir del ADN como molde, sacas el ARN mensajero. O sea, han buscado también ese Ori del promotor del SV40 y lo han observado; es decir, sus resultados cuando tú los ves pues muestran unos niveles que están por encima de la banda de esos 10 nanogramos y bueno, se han alarmado, pero ¿qué pasa? Que cuando tú miras el protocolo, echas en falta muchas. Cosas, echas en falta calibración. Todos estos protocolos hay que calibrarlos; echas en falta que se utilicen reactivos diferentes. Aquí hay uno de los autores que dice: yo uso mis reactivos, yo he cedido mis reactivos, pero tú has hecho los experimentos. No…